各位大神 老板让我扩增猪的一个基因片段 相关的文献报道很少 基本只有人的报道 然后在一篇毕业论文里找到了说在肾脏的表达量比较高。然后提了猪肾的RNA
做了RT开始扩增
自己和师兄师姐一起设计了将近10对引物 用高保真酶完全扩不出来 用Taq酶能扩出来 片段大小和目的片段也一致 但是胶回收去测序和连完载体去测序 测序结果和目的片段都完全不一致
想问一下大神们应该是哪方面的问题  引物 酶 模板都换了很多种 实在是黔驴技穷了 如果是引物有问题的话 像这种片段 应该怎么设计出靠谱的引物？
NCBI上的基因序列是https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/GQ421749.1

高保真酶是高保真，但是扩增效率低，你用高保真酶当然扩不出来，普通酶保真性不行，这段序列含C比较多，试试高GCbuffer的酶，或者可以试试KOD-FX酶。

楼主你太好了.........













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